Oloa

Tris acetate masima e masani ona faʻaaogaina i le sauniuniga o le TAE (Tris-acetate-EDTA) paʻu, lea e faʻaaogaina e fai ma faʻamalo ma i gels agarose.Tris Acetate-EDTA buffer o loʻo faʻaaogaina mo DNA agarose gel electrophoresis ae faʻaaogaina foi mo le le faʻaaogaina o le RNA agarose gel electrophoresis.O le DNA fa'alua fa'alua e fa'asolosolo vave i le TAE nai lo isi pa'u ma e ono vaivai i le taimi fa'alautele electrophoresis.E mafai ona foia le ta'amilosaga pa'u po'o le suia o le pa'u i le taimi e fa'alautele ai le eletise.E mafai ona fa'aaogaina i fa'aputuga eseese e su'esu'e ai le gaioi o le DNA ile fofo.Talu ai o le borate i le TBE buffer (Tris-Borate-EDTA Buffer, 10X Powder Pack, sc-296651) o se inhibitor malosi mo le tele o enzymes, e fautuaina le TAE buffer pe a vaʻavaʻai i talosaga enzymatic mo le DNA sample.Tris acetate masima ose pa puipui ma maualuga lagona i suʻega ATP ma firefly luciferase.

Fa'aoga: TAE fa'agasolo fa'apolopolo o le fa'aoga masani lea mo DNA agarose gel electrophoresis, ma e fa'aoga fo'i mo RNA agarose gel electrophoresis.O le DNA fa'alua fa'alua e fa'asolosolo vave atu i le TAE nai lo isi pa'u, ae e le mafai fo'i ona aau ona o le fa'aitiitiga o iona pa'u a'o fa'aumi le electrophoresis.Pa'u uila po'o fa'afesuia'i pa'u i taimi fa'aumiumi electrophoresis e mafai ona toe fa'amalieina le maualalo o le gafatia.2 Fa'amama le fa'apolopolo TAE fa'atumauina ina ia maua ai le 1 mMTAE fa'amau e iai le 40 mM Tris acetate ma le 1 mM EDTA, pH 8.3.1 mMTAE faʻapipiʻi e mafai ona faʻaogaina uma i gels agarose ma faʻapipiʻi taʻavale.Mo le fa'ai'uga aupito maualuga, e fautuaina e fa'alalo le voli fa'aaogaina i le 5V/cm (mamao i le va o eletise eletise).

Fa'aoga: TAE fa'agasolo fa'apolopolo o le fa'aoga masani lea mo DNA agarose gel electrophoresis i Chemicalbook gel, ma e fa'aaogaina fo'i mo le RNA agarose gel electrophoresis e le denaturing.O le DNA fa'alua fa'alua e fa'asolosolo vave atu i le TAE nai lo isi pa'u, ae e le mafai fo'i ona aau ona o le fa'aitiitiga o iona pa'u a'o fa'aumi le electrophoresis.Pa'u uila po'o fa'afesuia'i pa'u i taimi fa'aumiumi electrophoresis e mafai ona toe fa'amalieina le maualalo o le gafatia.O le TAE faʻapipiʻi faʻapipiʻi na faʻafefeteina ina ia maua ai le 1 mMTAE paʻu o loʻo i ai le 40 mM Tris acetate ma le 1 mM EDTA, pH 8.3.1 mMTAE faʻapipiʻi e mafai ona faʻaogaina uma i gels agarose ma faʻapipiʻi taʻavale.Mo le fa'ai'uga aupito maualuga, e fautuaina e fa'alalo le voli fa'aaogaina i le 5V/cm (mamao i le va o eletise eletise).

Fa'aoga: I le mauaina o le ATP fa'atasi ma le firefly luciferase, o lenei oloa e sili ona maaleale pa puipui;su'esu'ega fusifusia glutamate.

O le fusifusia o le [3H]l-glutamic acid e le mafai ona fa'aogaina i mea e le fa'afefe.

[3H] L-glutamic acid o loʻo fusifusia i microfuge tubes ma tioata na suʻesuʻeina i faʻamaufaʻailoga e fa.O le faʻapipiʻiina o talaʻaga i nei mea na faʻatauvaʻa, ae na faʻateleina i le centrifugation poʻo le suction i le Tris-HCl ma Tris-citrate buffer.O lenei fusi na matua itiiti pe Ina ua faʻaaogaina HEPES-KOH, poʻo Tris-acetate buffer.[3H] L-glutamate fusifusia i microfuge tubes na taofia e L- ae le D-isomers o le glutamate ma le aspartate.DL-2-amino-7-phosphonoheptanoic acid e leʻi faʻalavelaveina foi le fusifusia.O isi mea faʻapipiʻi na faʻaalia le maualalo i le faʻalavelave faʻafefe o: N-methyl-D-aspartate, quisqualate, L-glutamic acid diethyl ester, N-methyl-L-aspartate, kainate, ma le 2-amino-4 -phosphonobutyrate.O le fusifusia na fa'alavelaveina e le fa'apalapala o le fai'ai isumu.O le fusifusia [3H] glutamate e faalagolago i le polotini na maua mai i se sauniuniga fa'a'aisa fa'a'aisa pe a fa'amauina i le Tris-acetate buffer.E fautuaina le Tris-acetate poʻo le HEPES -KOH buffer e tatau ona faʻaogaina i le suʻega o le glutamate bin ding assay.Afai e fa'aogaina le Tris-HCl po'o le Tris-citrate buffer, e tatau ona faia se su'esu'ega fa'atonutonu talafeagai e fa'asa'o ai mo le fusifusia i paipa microfuge po'o fili tioata tioata.